La scienza è lo studio sistematico del mondo naturale. Come delineato nel Capitolo 2 di Scienze Ambientali , il suo obiettivo fondamentale è "comprendere i fenomeni naturali e spiegare come possano cambiare nel tempo". Per raggiungere questo obiettivo, la scienza si basa sull'osservazione empirica, sul ragionamento logico e sulla sperimentazione controllata, il più delle volte guidata dal ragionamento induttivo.
Il processo sistematico utilizzato per acquisire conoscenza scientifica è noto come metodo scientifico e inizia con l'osservazione dei fenomeni naturali: eventi o processi che si verificano senza l'intervento umano e possono essere rilevati dai sensi. Da queste osservazioni, gli scienziati formulano ipotesi, ovvero spiegazioni falsificabili e verificabili che definiscono una causa presunta (variabile indipendente) e prevedono un effetto (variabile dipendente). La National Academy of Sciences definisce la scienza come "l'uso di prove per costruire spiegazioni e previsioni verificabili di fenomeni naturali", sottolineando che ogni indagine scientifica deve essere fondata sul mondo osservabile. Qualsiasi spiegazione che derivi da fenomeni non osservati in natura, come gli effetti prodotti in condizioni di laboratorio, non può essere testata, verificata o falsificata e pertanto esula dai confini della scienza.
Questa distinzione è fondamentale nella valutazione dei metodi virologici. Il fenomeno naturale in esame – la malattia in un ospite vivente – non viene studiato attraverso l'osservazione diretta o la replicazione controllata di tale condizione. I virologi, invece, si affidano a metodi artificiali che non hanno alcuna somiglianza con il fenomeno stesso. Anziché purificare e isolare presunte particelle "virali" direttamente dai fluidi di un individuo malato e testarne la "patogenicità" attraverso l'esposizione naturale a un ospite sano – come si addice allo studio della malattia e della via di trasmissione proposta – i virologi conducono complessi esperimenti di coltura cellulare . In queste procedure, un campione di paziente non purificato viene aggiunto a una coltura di cellule – tipicamente derivate da reni animali o linee tumorali umane – e mantenuto per giorni in presenza di siero fetale bovino, antibiotici, antimicotici e altre sostanze estranee. Se si verifica un danno cellulare visibile o la morte, questo effetto – chiamato effetto citopatico o citopatogeno (CPE) – viene interpretato come prova indiretta della presenza di un "virus".
Tuttavia, l'effetto citopatogeno non è un fenomeno naturale, ma piuttosto un artefatto dell'ambiente di laboratorio. Deriva dalla rimozione delle cellule dal loro ambiente naturale e dalla loro esposizione a condizioni artificiali e spesso stressanti, tra cui sostanze chimiche tossiche, sieri estranei e altri additivi artificiali. Questi fattori da soli sono sufficienti a causare il deterioramento o la morte cellulare, indipendentemente da una presunta presenza "virale".
Questo fu riconosciuto da John Franklin Enders, l'uomo che portò alla ribalta questo metodo a metà degli anni '50. In un illuminante articolo del 1954 intitolato " Cytopathology of Virus Infections: Particular Reference to Tissue Culture Studies" – pubblicato lo stesso anno del suo influente studio sul morbillo che mostrava la presenza di CPE nelle colture "non infette" – John Enders ammise che la CPE poteva essere scatenata da molti agenti oltre ai "virus". Riconobbe che gli effetti citopatici sono influenzati da numerosi fattori, noti e ignoti. Tra questi, l'età e il tipo di tessuto del donatore, le condizioni di coltura e le variabili ambientali. In altre parole, le alterazioni cellulari che i virologi attribuiscono a un "virus" potrebbero non avere alcuna connessione con esso.
I fenomeni sopra menzionati, relativi alle alterazioni del Gruppo 1, possono essere evocati da molti agenti nocivi. Di conseguenza, non possono essere considerati, di per sé, necessariamente il risultato dell'attività virale. Per dimostrarlo, è necessario applicare determinate procedure di controllo (coltivazione seriale, prevenzione delle alterazioni mediante anticorpi omologhi, ecc.). La familiarità, tuttavia, con gli effetti di uno specifico virus in un dato sistema cellulare consente spesso all'osservatore di concludere provvisoriamente che questo virus sia responsabile.
Tra gli indici morfologici di danno virale, la formazione di corpi inclusi (Gruppo 2) è la più caratteristica, sebbene anche in questo caso questo processo non possa essere accettato come prova conclusiva dell'attività virale, poiché alcuni fattori chimici e altri fattori sconosciuti possono condizionarne lo sviluppo. I corpi inclusi sono stati i primi cambiamenti citopatici ad essere ricercati in vitro e impiegati come criteri di infezione. Come indici di moltiplicazione virale, tuttavia, sono meno utili dei cambiamenti del Gruppo 1, poiché queste strutture possono essere dimostrate inequivocabilmente solo in preparati colorati.
La citopatogenicità in vitro è influenzata da fattori, alcuni dei quali sono noti, mentre molti devono ancora essere definiti. Inizialmente, alcuni di quelli ormai riconosciuti saranno menzionati come introduzione alla revisione delle osservazioni registrate sul comportamento dei singoli agenti. Di primaria importanza è la specie da cui derivano le cellule. Analogamente alla gamma di ospiti di un virus è la sua gamma citopatogena nelle cellule coltivate. Tuttavia, la correlazione tra la suscettibilità dell'organismo e le sue cellule in vivo non sempre esiste. Infatti, sebbene questa correlazione si verifichi frequentemente, i tessuti di una specie suscettibile occasionalmente non riescono a supportare la moltiplicazione virale, mentre si verifica anche il contrario.
L'età del donatore di tessuto può influenzare la citopatogenicità. Proprio come gli animali giovani sono spesso più suscettibili alle infezioni, così i loro tessuti possono essere più vulnerabili ai danni causati dal virus, anche in questo caso questa correlazione non è invariabile. La maggior parte dei dati pertinenti indica che l'immunità acquisita alle infezioni virali non si riflette in una maggiore resistenza cellulare, un fatto vantaggioso dal punto di vista tecnico poiché elimina ogni preoccupazione relativa allo stato immunologico dell'animale donatore.
L'intensità e il grado del danno citopatico possono variare a seconda del ceppo virale o delle condizioni in cui è stato propagato prima dello studio in coltura tissutale. Il ricercatore deve essere preparato a riscontrare tali variazioni nello studio di diversi rappresentanti di una specie virale. Una citopatogenicità moderata o debole può talvolta essere aumentata da passaggi seriali in vitro.
In effetti, è stato dimostrato che diversi fattori "non virali" inducono lo stesso CPE nelle colture cellulari. Tra questi, contaminazione batterica, parassiti, amebe, additivi chimici, antibiotici, antimicotici, privazione di nutrienti, stress ambientale e persino la degradazione delle cellule stesse legata all'età. Ho approfondito questi fattori in articoli precedenti [ qui , qui e qui ].
Anche la privazione di siero – una fase di routine nei protocolli virologici – ha ripetutamente dimostrato di indurre morte cellulare e alterazioni morfologiche indistinguibili dal cosiddetto CPE utilizzato per dedurre la presenza "virale". Ciò è stato dimostrato in studi pubblicati e confermato dal Dott. Stefan Lanka nelle sue ricerche indipendenti. La privazione prolungata di siero può da sola portare ad arrotondamento cellulare, distacco e apoptosi, il che significa che gli effetti osservati nelle colture cellulari potrebbero derivare dalle condizioni artificiali stesse, piuttosto che da un "virus".
Ad esempio, uno studio del 1997 sulle cellule NIH-3T3 ha riscontrato una perdita di vitalità e morte cellulare dovuta alla carenza di siero e all'uso di antibiotici:
Effetto antiapoptotico di ras nell'apoptosi indotta dalla deprivazione del siero e dall'esposizione all'actinomicina D
“Il presente studio rivela che le cellule NIH-3T3 non trasformate rispondono con una perdita di vitalità alla privazione di siero e anche al farmaco citostatico actinomicina D. La perdita di vitalità è associata alla comparsa di cellule che mostrano le caratteristiche classiche dell'apoptosi (condensazione nucleare, restringimento cellulare).”
Le cellule NIH 3T3 rimarranno nel ciclo cellulare in presenza di supporto sierico per la crescita, mentre in assenza di supporto sierico il ciclo si arresta in G1 e, dopo un periodo di diverse ore, le cellule vanno incontro ad apoptosi. L'espressione costitutiva di vH-ras attiva segnali importanti per stimolare simultaneamente la progressione in G1 e reprimere la morte cellulare durante la privazione di siero.
Allo stesso modo, uno studio del 1999 sulle cellule V79 ha rilevato la morte cellulare e il distacco sia a causa della carenza di siero sia a causa dell'uso di antibiotici:
Effetto della carenza di siero sull'espressione e la fosforilazione di PKC-alfa e p53 nelle cellule V79: implicazioni per la morte cellulare
È stato studiato l'effetto della carenza di siero sull'espressione e la fosforilazione di PKC-alfa e p53 in cellule V79 di criceto cinese. La carenza di siero ha portato all'arresto della crescita, all'arrotondamento delle cellule e alla comparsa di nuove bande per PKC-alfa e p53 nei Western blot . L'incubazione prolungata (> o = 48 ore) in terreno di coltura privo di siero ha portato al distacco e alla morte cellulare. Il trasferimento delle cellule in terreno di coltura fresco contenente il 10% di siero prima, ma non dopo, il distacco cellulare ha invertito le alterazioni osservate in PKC-alfa e p53, prevenendo anche il successivo distacco cellulare.
La nostra osservazione della morte cellulare indotta da carenza sierica prolungata o dall'esposizione a staurosporina o actinomicina D è in accordo con altri studi. È stato dimostrato che la carenza sierica (Chou e Yung, 1997), la staurosporina (Couldwell et al., 1994) e l'actinomicina D (Chou e Yung, 1997) inducono la morte cellulare per apoptosi.
Questi studi dimostrano che la sola deprivazione di siero può causare lo stesso danno cellulare attribuito a un'"infezione virale". Come osservato in precedenza, anche diverse altre variabili, come la contaminazione batterica o l'esposizione a sostanze chimiche, possono causare questo danno, nessuna delle quali richiede l'esistenza di un agente "virale". Ciò evidenzia un difetto critico della virologia: il ricorso a effetti non specifici di un "virus" come presunta prova della sua presenza.
Gli effetti citopatogeni sono prodotti artificiali derivanti da manipolazioni di laboratorio, non da osservazioni di malattie naturali. Poiché il CPE non si presenta in natura e può derivare da un'ampia gamma di cause indipendenti, non soddisfa i criteri per essere considerato una variabile dipendente valida negli esperimenti che mirano a spiegare i processi patologici naturali. Il suo utilizzo come prova della presenza e della causalità "virale" riflette un allontanamento dalla scienza empirica, che sostituisce fenomeni naturali osservati e ipotesi verificabili e falsificabili con artefatti artificiali e inferenze speculative.
È chiaro a chi comprende le scienze naturali, il metodo scientifico e il ragionamento logico che le colture cellulari sono un'impostazione pseudoscientifica . La letteratura è già ricca di esempi che evidenziano i difetti intrinseci di questa metodologia. Tuttavia, non fa mai male aggiungere ulteriori prove, soprattutto quando provengono direttamente dai dati pubblicati. Un caso particolarmente rivelatore che smaschera ulteriormente questa pratica scientificamente invalida riguarda quello che divenne noto come effetto citopatico specchio (mCPE), in cui si osservava danno cellulare anche in assenza di presunto materiale "virale". Grazie al lavoro di Vlail Petrovich Kaznacheev e colleghi in Russia tra la fine degli anni '60 e l'inizio degli anni '80, possiamo piantare un altro chiodo nella bara pseudoscientifica della virologia evidenziando la natura aspecifica dei suoi effetti artificiali, creati in laboratorio.
Per studiare questa comunicazione "non fisica", il team di Kaznacheev progettò esperimenti incentrati sul ruolo della radiazione ultravioletta (UV). I loro studi del 1979 seguirono due percorsi principali:
Riproduzione del CPE in una coltura con rivelatore a specchio esposta otticamente (ma non fisicamente) a una coltura irradiata con raggi UV.
Studio dell'mCPE in colture di rivelatori pretrattate con UV minimo, quindi poste in contatto ottico con colture radianti "infette da virus".
Utilizzando cellule Hep-2 (carcinoma laringeo umano) e FECh (fibroblasti embrionali umani), separate da quarzo (che trasmette i raggi UV) o vetro (che li blocca), hanno scoperto che si verificava CPE in 384 esperimenti su 500, ma solo quando veniva utilizzato il quarzo. Nessun CPE si è verificato attraverso il vetro. Nella seconda serie di esperimenti, un lieve pretrattamento UV delle colture a specchio le ha rese più suscettibili al CPE quando esposte otticamente a cellule "infette da virus", nonostante non vi fosse alcun passaggio di materiale "virale" tra le camere. Ciò ha dimostrato che il CPE potrebbe derivare da interazioni "non virali" mediate dalla luce , non da "infezione".
Kaznacheev ha concluso che le cellule stressate o morenti, in particolare quelle sottoposte a stress UV, emettono segnali che possono innescare una specifica degenerazione morfologica nelle cellule vicine, anche in assenza di contatto diretto o di materiale "virale". Ciò ha messo in discussione l'ipotesi convenzionale secondo cui il CPE sia la prova esclusiva di "infezione virale".
L'obiettivo della ricerca era studiare il ruolo della radiazione UV nelle interazioni intercellulari a distanza (DII) e le condizioni per ottenere un effetto citopatico "specchio" (MCPE). È stato dimostrato che uno stato estremo delle cellule nella coltura irradiante, causato dalla radiazione UV, induce un effetto citopatico a distanza (CPE) in una coltura rivelatore intatta , in contatto ottico solo con essa, riflettendo la specificità delle caratteristiche morfologiche registrate nella coltura interessata. L'irradiazione UV preliminare delle cellule rivelatore facilita la manifestazione dell'MCPE.
Nel 1980, il gruppo di Kaznacheev ampliò il proprio lavoro per esplorare se le radiazioni elettromagnetiche, in particolare nello spettro UV, potessero svolgere una funzione di segnalazione biologica. Esposero colture di tessuti a fattori di stress come "virus" (Coxsackie A-13 e "virus" della peste aviaria) o cloruro di mercurio. Le colture di tessuti furono scelte per la loro sensibilità e le risposte osservabili allo stress cellulare. Quando le accoppiarono a colture sane di rivelatori, fisicamente isolate ma otticamente connesse, i ricercatori riscontrarono la stessa degenerazione caratteristica nelle colture specchio.
Interazione elettromagnetica intercellulare a distanza tra due colture di tessuti
L'esistenza di un'emissione intrinseca molto debole di radiazione da parte di oggetti biologici (biochemiluminescenza) è ormai generalmente accettata [1-4]. Finora sono state condotte poche ricerche volte a determinare il possibile ruolo della radiazione elettromagnetica nei sistemi biologici, sebbene sia stata dimostrata la possibilità che gli oggetti biologici possano emettere radiazione intrinseca di diverse gamme [5-7]. Vi è motivo di supporre che l'interazione elettromagnetica sia un principio generale di scambio di informazioni tra sistemi biologici. Quanti con diverse caratteristiche di frequenza potrebbero forse essere portatori di informazione.
Dal 1966 gli autori hanno studiato il fenomeno dell'interazione intercellulare a distanza dovuta alla radiazione elettromagnetica nella banda UV [8-11]. Il metodo di rilevamento biologico suggerito da AG Gurvich è stato utilizzato nelle nostre indagini per studiare l'azione biologica della radiazione elettromagnetica nel biosistema.
Poiché eravamo interessati a scoprire se la radiazione elettromagnetica delle cellule svolgesse una funzione di segnale, era necessario scegliere uno stato delle cellule che potesse essere chiaramente analizzato con l'ausilio del rivelatore biologico. Un oggetto idoneo da questo punto di vista era una coltura tissutale infettata da diversi virus (Coxsackie A-13, il classico virus della peste aviaria - FPV) o trattata con cloruro di mercurio. In questi casi, l'azione specifica dei virus e del cloruro di mercurio poteva essere analizzata sulla base della loro azione citopatica e delle alterazioni immunologiche. Gli esperimenti sono stati pianificati in modo che la coltura tissutale infettata da virus o danneggiata da cloruro di mercurio fosse la fonte di un segnale specifico, codificato in una radiazione cellulare molto debole, e la coltura tissutale intatta (non infettata dal virus) fungesse da rivelatore di questa radiazione. Nelle cellule della coltura intatta (d'ora in poi denominata coltura tissutale "specchio"), in contatto ottico con la coltura tissutale interessata, si sviluppavano tutte le caratteristiche morfologiche degli stati estremi specificamente caratteristici dell'agente corrispondente. Queste caratteristiche morfologiche vengono d'ora in poi descritte come effetto citopatico "specchio" (CPE).
Il team ha utilizzato colture primarie di fibroblasti embrionali umani e di pollo, nonché colture di tessuto renale di scimmia trapiantabile. In ogni esperimento, entrambe le camere sono state immerse in un terreno nutritivo uniforme per garantire che le cellule rimanessero nutrite e vitali. Sono stati inclusi controlli per rilevare eventuali degenerazioni spontanee. In totale, hanno condotto circa 1.500 esperimenti con controlli, esaminando attentamente ciascuno per individuare eventuali cambiamenti morfologici.
METODO SPERIMENTALE
La coltura tissutale utilizzata come oggetto di prova è stata coltivata in apposite camere su supporti per vetrini in quarzo o vetro di diverso spessore (da 0,2 a 2 mm), saldati a un giunto di vetro smerigliato. La capacità di trasmissione dei vetrini in quarzo nell'intervallo di 280-320 nm era del 70-90%. La capacità di trasmissione massima dei vetrini in vetro si trovava nella regione del visibile, a partire da 440 nm. Sono state utilizzate colture primarie di fibroblasti embrionali umani e di pollo, nonché colture di tessuto renale di scimmia trapiantabile.
Dopo che si era formato un monostrato sul fondo delle camere, le camere con il fattore nocivo introdotto sono state montate a coppie con i supporti per vetrini intatti e fissate a un tamburo rotante perpendicolarmente all'asse. Il tamburo è stato posizionato all'interno di un termostato oscurato (37°) e ruotato insieme alle camere a una velocità di 25 giri al minuto. Le cellule nelle due camere sono state quindi immerse equamente nel terreno nutritivo, non si sono seccate ed erano adeguatamente nutrite. Tutti gli esperimenti sono stati accompagnati da un controllo per il rilevamento della degenerazione spontanea delle cellule della coltura tissutale. Dopo 2-4 giorni le camere sono state rimosse e smontate, i supporti per vetrini con le cellule in crescita sono stati sigillati e, dopo fissazione e colorazione, le colture sono state esaminate morfologicamente. Il CPE è stato calcolato in base al rapporto tra il numero di cellule morenti e il numero totale di cellule e in base al tipo di alterazioni morfologiche. Il CPE è stato considerato debolmente positivo se il rapporto era 1:10, medio se era 1:5 e fortemente positivo se era 1:2. Complessivamente sono stati effettuati circa 1500 esperimenti, compresi i controlli.
In 350 esperimenti che utilizzavano il presunto “virus” Coxsackie A-13, si sono verificati identici effetti citopatogeni, ma la degenerazione nelle camere “specchio” non inoculate è risultata costantemente in ritardo di 12-14 ore rispetto alle colture “infette”.
È interessante notare che, nei tipici esperimenti di virologia, i ricercatori spesso interrompono l'incubazione non appena solo la coltura "infetta" mostra CPE, interpretando questo come prova di attività "virale". Eppure, in questo caso, anche le camere a specchio non inoculate – che fungevano essenzialmente da controlli "fintamente infetti" – hanno sviluppato un CPE identico, solo leggermente ritardato. Ciò indebolisce seriamente l'affermazione che una degenerazione precoce nelle colture inoculate sia prova di una causalità "virale".
Ogni esperimento includeva controlli per rilevare la degenerazione spontanea nelle camere "non infette". In particolare, quando è stata utilizzata una semplice barriera di vetro tra le camere, non si è verificata alcuna CPE speculare. Il presunto "virus A-13" è stato regolarmente "isolato" dalle camere "infette", ma mai dalle camere speculari, indipendentemente dalla presenza o meno di CPE speculare. Una CPE speculare positiva è stata osservata nel 74% degli esperimenti.
RISULTATI SPERIMENTALI
I. Il CPE "specchio" dopo l'infezione con il virus Coxsackie A-13 (350 esperimenti). L'azione citopatica del virus Coxsackie A-13 consiste nella rottura del monostrato e nella comparsa di cellule rotonde. Successivamente, le cellule rotonde basofile subiscono picnosi: si restringono, diventano poligonali e il loro nucleo diventa fortemente ipercromico. Le cellule picnotiche si disintegrano quindi e si possono osservare "frammenti" picnotici insieme a cellule solitarie intatte. Nelle colture cellulari "specchio" si è potuta osservare l'inibizione della mitosi. Anche il monostrato si è frammentato con la comparsa di cellule picnotiche ipercromiche. Cellule di questo tipo si sono successivamente disintegrate e, nelle colture cellulari "specchio", si è potuta osservare l'inibizione della mitosi. Cellule di questo tipo si sono successivamente disintegrate e, nelle colture "specchio", sono state osservate essenzialmente le stesse forme evolutive di degenerazione delle colture infettate dal virus. Il ritmo di sviluppo della degenerazione nelle camere "a specchio" era di circa 12-14 ore in ritardo. Tutti gli esperimenti sono stati accompagnati da un controllo appropriato per il rilevamento della degenerazione spontanea nella coltura non infetta. Nelle camere in cui è stato utilizzato il vetro semplice come supporto per i vetrini, non si è sviluppato alcun CPE "a specchio". Durante i passaggi dalle camere infette, il virus A-13 è stato regolarmente isolato. Anche dopo ripetuti passaggi, non è stato possibile isolare alcun virus dalle camere "a specchio", né con un CPE "a specchio" positivo né con uno negativo. Un CPE "a specchio" positivo si è verificato nel 74% dei casi (Figg. 1-3).
In 453 esperimenti che utilizzavano il presunto "virus" della peste aviaria, è stato osservato un effetto citopatico "specchio" (mCPE) nel 78% dei casi. Come negli studi precedenti, solo le camere "infette" sono risultate positive al "virus" al passaggio del loro liquido di coltura. I risultati negativi dei test di emoagglutinazione indiretta sono stati considerati dal team come "conferma" del fatto che, anche in presenza di un CPE "specchio", il "virus" era assente dalle camere "specchio".
2. CPE "a specchio" dopo infezione con virus FPV (453 esperimenti). L'esperimento con FPV ha seguito lo stesso schema di quello con il virus Coxsackie A-13. In tutte le camere infette è stata osservata la degenerazione caratteristica del FPV classico. Questa si manifestava con la rottura del monostrato, l'arrotondamento di molte cellule e una tendenza delle cellule a formare cluster. Allo stesso tempo, si formavano grandi strutture simplasmatiche, nella zona periferica delle quali i nuclei formavano una palizzata. Successivamente, le singole cellule si rimpicciolivano. Nelle camere "a specchio" non infette, in contatto ottico con le camere infette, è stata osservata la presenza di un CPE "a specchio" nel 78% dei casi. Nella coltura "a specchio" sono comparse molte singole cellule basofile arrotondate, molte delle quali in seguito non hanno perso il contatto tra loro, cosicché il monostrato si è diviso in una serie di grandi complessi cellulari simili a grappoli d'uva. Il citoplasma delle cellule in questi complessi era altamente vacuolizzato e il loro nucleo era condensato.
Il passaggio del liquido di coltura dalle camere infette e non infette ha mostrato la presenza del virus solo nelle camere infette. Il test di emoagglutinazione con eritrociti avicoli e liquido di coltura da camere infette con FPV ha rivelato emoagglutinine nelle camere infette in titoli di 1:40, 1:80 e 1:160. Il liquido di coltura dalle camere non infette, anche in presenza di un CPE "specchio", non ha prodotto un test di emoagglutinazione positivo, prova dell'assenza del virus.
In altri 412 esperimenti, è stato indotto danno tossico in colture di fibroblasti di pollo e umani utilizzando il cloruro mercurico come modello "non virale" di stati citopatici. Una dose tossica di HgCl₂ ha causato la morte cellulare entro 2-3 giorni. Quando l'esperimento è stato condotto nelle stesse condizioni di quelli con presunti "virus", un CPE "specchio" è comparso nel 78% dei casi. Questo effetto è risultato statisticamente affidabile, rientrando nei limiti di confidenza del 90-65% con un livello di significatività del 95%. La frequenza di CPE "specchio" causata da HgCl₂ non è risultata significativamente diversa da quella osservata con i due "virus".
3. CPE "specchio" dopo avvelenamento cellulare con cloruro mercurico (412 esperimenti). Per studiare l'universalità del tipo di connessioni intercellulari così rivelate, è stato scelto il danno tossico alle cellule di colture tissutali di fibroblasti di pollo e umani con cloruro mercurico come modello diverso di stati citopatici. È stata utilizzata una dose tossica di HgCI2, che ha causato la morte delle cellule della coltura tissutale dopo 2-3 giorni attraverso il blocco degli enzimi respiratori. Nelle camere con HgCI2 si è sviluppato un effetto citopatico con disintegrazione del monostrato e degenerazione granulare e vacuolare delle cellule e cariopicnosi. Il processo si è concluso con la morte totale del monostrato. Anche il CPE "specchio" consisteva in disintegrazione del monostrato, vacuolizzazione del citoplasma e cariopicnosi (78% degli esperimenti positivi). Per ottenere un CPE "specchio" negli esperimenti con HgCI2 è stato necessario eseguire l'esperimento nelle stesse condizioni in cui venivano utilizzati i virus.
È stato allestito un controllo per il rilevamento della degenerazione spontanea. Nelle camere in cui è stato utilizzato vetro semplice come supporto per il vetrino, non si è sviluppato alcun CPE "specchio" di HgCI2. L'analisi statistica dei risultati ha perseguito due obiettivi: I) determinazione della probabilità di ottenere un CPE "specchio" per limiti di confidenza del 95% (livello di significatività del 5% del criterio di Pearson), 2) determinazione della similarità o differenza tra l'azione dei virus e quella di HgCI2 mediante il confronto di distribuzioni alternative utilizzando il criterio di Pearson.
I risultati hanno mostrato che un CPE "specchio" può essere rilevato in modo affidabile entro limiti di confidenza dal 90 al 65% e con un livello di significatività del 95%. L'efficacia d'azione dei due virus e dell'HgCI2 non ha mostrato differenze significative per quanto riguarda la produzione di un CPE "specchio".
Gli esperimenti hanno quindi dimostrato che in presenza di un contatto ottimale tra due colture di tessuti isolati si verifica un'interazione a distanza che si esprime come ripetizione delle caratteristiche morfologiche del processo citopatologico indotto in una delle colture mediante virus o cloruro mercurico, nell'altra coltura di tessuto intatto, o in altre parole, si verifica un CPE "specchio".
Il lavoro di Vlail Petrovich Kaznacheev e dei suoi colleghi è altamente controverso, poiché suggerisce che le malattie possano essere trasmesse elettromagneticamente e, soprattutto, che non siano necessari presunti "virus" per provocare effetti citopatogeni (CPE). Le implicazioni sono profonde: negli esperimenti nella camera a "specchio", il CPE non poteva essere attribuito alla "replicazione virale", poiché non venivano introdotte presunte particelle "virali", né era possibile "isolarne" qualcuna in seguito. L'unica variabile costante che distingueva le configurazioni che producevano CPE a specchio da quelle che non lo facevano era la trasmissione della luce ultravioletta.
Ciò mette direttamente in discussione un presupposto virologico fondamentale: che il CPE sia un indicatore affidabile di attività "virale". Se si verifica un'identica degenerazione cellulare in completa assenza di qualsiasi presunto materiale "virale", allora il CPE non può essere considerato una prova definitiva di "infezione" o presenza "virale". Il fatto che le colture mirror abbiano mostrato gli stessi schemi degenerativi – con solo un ritardo temporale – suggerisce la presenza di un segnale causale, ma non di tipo "virale". Che il meccanismo sia elettromagnetico, fotonico o qualcosa di completamente diverso, il punto critico rimane: il CPE da solo non è una prova di causalità "virale".
Sorprendentemente, la CIA prese nota della ricerca di Kaznacheev. In una traduzione non classificata di un articolo russo del 1974, l'autore descriveva come, quando una delle colture veniva contaminata da un "virus" o avvelenata, "accadeva la cosa più sorprendente: dopo che la prima coltura era morta, toccava alla seconda, anche se la possibilità che il virus vi fosse penetrato era stata esclusa". Il fenomeno dell'"effetto citopatico a specchio" fu ufficialmente riconosciuto come scoperta scientifica e registrato nel registro delle scoperte dell'URSS con il numero 122.
La designazione 122 corrisponde a un brevetto sovietico depositato il 15 febbraio 1966. Descrive il "fenomeno delle interazioni elettromagnetiche intracellulari distanziate in un sistema di due colture tissutali". Il brevetto afferma:
"La presente invenzione è registrata presso l'ex Registro nazionale delle invenzioni dell'Unione Sovietica (Fondato) n. 122, pubblicato il 15 febbraio 1966 [Invenzione: VP Kaznacheev, SP Shurin, LP Mikhailova si basa sull'invenzione "Fenomeno delle interazioni elettromagnetiche intracellulari distanziate in un sistema di due colture di tessuti".
Un'altra coltura, manifestata sotto forma di un effetto citopatico "specchio" (CPE), si verifica a seguito dell'azione di un fattore di proprietà biologica, chimica o fisica su una qualsiasi di due colture identiche. Fenomeni precedentemente sconosciuti di interazioni elettromagnetiche tra cellule distanti, con risposte tessuto-specifiche, sono stati ora dimostrati sperimentalmente. In questo caso, l'effetto citopatico "specchio" determina il ruolo del sistema cellulare come rivelatore delle proprietà di regolazione della radiazione elettromagnetica.
Poiché questo fenomeno artificiale è autentico e riproducibile, dovrebbe sollevare seri dubbi sulla consolidata convinzione che gli effetti citopatici (CPE) in laboratorio siano intrinsecamente di origine "virale". La comparsa di simili alterazioni degenerative in colture non inoculate – in condizioni prive di qualsiasi presunto "virus" – ha suggerito che le cellule possano rispondere a fattori di stress ambientali o addirittura influenzarsi a vicenda attraverso mezzi non chimici, forse elettromagnetici. Ciò è in linea con il crescente interesse per la biorisonanza e i modelli di comunicazione cellulare basati sul campo, che sfidano il paradigma meccanicistico convenzionale. Come minimo, tali risultati smascherano la natura sostanzialmente non scientifica degli studi in vitro sui CPE e dovrebbero sollevare seri dubbi sulla loro rilevanza per gli organismi viventi.
Quando i virologi sostengono che un "virus" debba esistere a causa del danno osservato in una coltura cellulare dopo l'inoculazione con un campione clinico, si stanno cimentando in una sorta di ragionamento circolare. Presumono la presenza di un "virus", introducono un campione che si presume lo contenga in una coltura e poi interpretano qualsiasi morte cellulare o alterazione morfologica risultante come prova dell'attività del "virus". Questo metodo non solo solleva la questione, ma è anche soggetto a fattori di confondimento, poiché numerosi altri fattori potrebbero causare effetti simili.
Le colture cellulari sono sistemi sensibili, facilmente alterati da una serie di variabili, tra cui variazioni di pH, deplezione di nutrienti, accumulo di tossine, stress ossidativo, agitazione meccanica e altri fattori di stress. Se una coltura mostra CPE dopo l'inoculazione, ciò potrebbe essere dovuto a uno qualsiasi di questi fattori, non necessariamente alla presenza di un "virus patogeno".
In effetti, l'osservazione di CPE sia nelle colture di controllo esposte che in quelle non esposte indebolisce l'affermazione che il CPE sia un effetto "virus-specifico". In un esperimento del 1990 che cercava di replicare l'"effetto citopatico specchio" di Kaznacheev, i ricercatori hanno irradiato colonie di fibroblasti di embrioni di pollo con luce ultravioletta (UV), ottenendo un effetto citopatico del 30,1%. Colonie adiacenti non irradiate, poste a contatto ottico, hanno mostrato una citopatia del 28,8%. Nel frattempo, due gruppi di controllo che non hanno ricevuto alcuna esposizione ai raggi UV hanno mostrato una media di citopatia rispettivamente del 14,5% e del 14,2%. Sebbene i ricercatori abbiano ipotizzato che l'aumento del CPE nei gruppi sperimentali fosse causato dall'esposizione ai raggi UV, ciò lascia aperta la stessa domanda fondamentale: gli effetti erano davvero il risultato della segnalazione intercellulare indotta dai raggi UV o semplicemente di condizioni ambientali non considerate?
Sebbene i ricercatori abbiano confermato che le cellule emettono luce dopo l'irradiazione UV, non hanno trovato prove convincenti che questa emissione portasse a effetti comunicativi strutturati nelle cellule adiacenti. Hanno concluso:
L'effetto citopatico a specchio riportato da Kaznacheev è stato studiato per accertare se colture di fibroblasti di embrioni di pollo emettessero luce dopo l'esposizione a luce ultravioletta. L'affermazione che queste cellule emettano luce dopo essere state irradiate con luce ultravioletta è stata corroborata in modo soddisfacente. L'effetto citopatico a specchio non lo è stato. Altri meccanismi di morte cellulare nelle colonie cellulari necessitano di ulteriori indagini prima che l'affermazione di Kaznacheev possa essere accettata.
Sebbene ciò abbia indebolito l'interpretazione di Kaznacheev della comunicazione intenzionale basata sulla luce, non ha eliminato l'osservazione fondamentale: effetti citopatici simili possono manifestarsi in colture separate, non inoculate, in condizioni condivise. Il meccanismo potrebbe rimanere poco chiaro, ma l'implicazione è innegabile: l'epatite cronica cronica (CPE) può insorgere attraverso cause "non virali", potenzialmente sistemiche.
Pertanto, anche quando si osserva un CPE significativo, questo non convalida la presenza di un "virus". Dimostra solo che le colture cellulari possono essere danneggiate in una varietà di condizioni artificiali. E se anche colture "non infette" mostrano CPE – o se effetti simili possono essere indotti con mezzi "non virali" come l'esposizione ai raggi UV – allora la "logica" di equiparare il CPE all'"isolamento del virus" crolla.
Ciò rivela che l'attribuzione del CPE come prova virologica poggia su una base profondamente errata. Senza una causa verificata in modo indipendente – una vera variabile indipendente – l'attribuzione del CPE a un "virus" rimane un presupposto non dimostrato.
È fondamentale che questi effetti siano osservati solo in condizioni artificiali di laboratorio: le cellule vengono rimosse dal loro ambiente nativo, private di input normali ed esposte a sostanze estranee, antibiotici e spesso terreni non fisiologici. Queste circostanze artificiali non imitano alcun contesto biologico naturale. Pertanto, gli effetti degenerativi che producono – compresi quelli etichettati come "virali" – sono artefatti dell'ambiente sperimentale stesso, piuttosto che segni di "infezione patogena" e "replicazione virale". Il fatto che effetti simili possano essere indotti senza alcun agente "virale" indica che ciò che viene interpretato come patologia "virale" è una risposta generale allo stress a condizioni tossiche o innaturali.
Questo apre le porte a una pericolosa soggettività: una volta che effetti arbitrari e artificiali vengono trattati come segnali significativi, chiunque può inventare la propria narrativa preferita per spiegarli. Un ricercatore potrebbe parlare di un "nuovo virus", un altro di una "disfunzione immunitaria", un terzo di "patogeni latenti" o fattori scatenanti ambientali. Ma nessuna di queste è una conclusione scientifica : sono storie raccontate su fenomeni creati in laboratorio, senza una verifica indipendente di alcuna causa sottostante. Questa non è scienza. È narrazione mascherata da metodo.
La scienza, intesa correttamente, è l'osservazione disciplinata dei fenomeni naturali attraverso ipotesi verificabili e falsificabili, fondate sulla realtà. Eppure la virologia moderna si discosta da questo standard. Costruisce un sistema chiuso in cui la degradazione cellulare viene indotta in condizioni artificiali e poi attribuita retroattivamente a un ipotetico "virus", che non è né isolato in senso classico, né direttamente osservato come causa di malattia in un ospite vivente. Questa inversione di metodo sostituisce l'evidenza empirica diretta con l'inferenza e la causalità verificabile con la correlazione interpretativa.
L'effetto citopatico – e il suo cosiddetto "specchio" nel finto CPE – non sono finestre sul comportamento "virale" in natura. Sono illusioni sperimentali: risultati fabbricati da sistemi progettati per confermare ipotesi precedenti. Trattando queste risposte artificiali come prova di una causalità "virale", la virologia si sposta dalla scienza alla simulazione. Non osserva, costruisce. Non scopre, presuppone. Se la scienza vuole mantenere la sua integrità come mezzo per comprendere il mondo naturale, allora la virologia deve essere tenuta agli stessi standard empirici di qualsiasi altra disciplina, altrimenti deve essere riconosciuta per ciò che è diventata: una deviazione pseudoscientifica fondata su ragionamenti circolari, artefatti sperimentali e un profondo abbandono del metodo scientifico.
I Baileys hanno avuto anche un'ampia discussione con Etienne de la Boetie, autore di "Government" - La più grande truffa della storia, smascherata! e "To See The Cage Is To Leave It - 25 Techniques the Few Use to Control The Many".
Ha inoltre affermato che l'Istituto nazionale finlandese per la salute e il benessere (THL) non può citare prove scientifiche dell'"H5N1" o di qualsiasi altro "virus".
ha avuto un'interessante intervista con l'autore Roman Bystrianyk sulla drastica riduzione della mortalità dovuta a malattie attraverso misure igienico-sanitarie, un'alimentazione equilibrata e migliori standard di vita rispetto ai vaccini.
🚨 📣🚨 📣🚨 📣🚨 📣 COMUNICATO STAMPA 🚨 📣🚨 📣🚨 📣🚨 📣 Pubblicati in Gazzetta Ufficiale n. 268 del 15 novembre 2024 (pagine 137-138 del file) i quattro quesiti referendari con i quali viene chiesta l’abrogazione degli obblighi vaccinali pediatrici e delle odiose sanzioni pecuniarie e scolastiche che trasformano la vaccinazione dei bambini come un atto troppo rischioso da molti genitori. L’iniziativa è promossa da un gruppo di cittadini che ha inteso reagire con metodo democratico all’immobilismo della politica e al disinteresse -o al diverso interesse- del Legislatore su esigenze sanitarie e sulla stessa volontà popolare contraria alle disposizioni oggetto di quesito referendario, manifestata con un disegno di legge di iniziativa popolare chiuso nel cassetto dal 2018 (cfr. G.U. 27 giugno 2018, serie generale, numero 147 pag. 60) e da un nuovo disegno di legge di iniziativa popolare in corso di presentazione da parte di numerose associazioni della società civile. Il popolo st...
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